Więcej informacji o utracie antygenu p53 w przechowywanych skrawkach parafiny

Prioleau i Schnitt (wydanie z czerwca) opisali potencjalny problem utraty antygenu p53 na szkiełkach przechowywanych w temperaturze pokojowej przez dwa miesiące. Przebadaliśmy szkiełka wycięte z utrwalonych w formalinie bloków zatopionych w parafinie zawierających raka jelita grubego p53-dodatniego i przypadkowo przechowywanych w temperaturze pokojowej przez okres od 6 do 14 miesięcy. Stwierdziliśmy, że reaktywność p53 można przywrócić metodą odzyskiwania antygenu2 w oparciu o ogrzewanie szkiełek w kuchence mikrofalowej.
Przeanalizowaliśmy slajdy od czterech pacjentów z rakiem jelita grubego in situ, którzy nie wykryli plam na p53 konwencjonalnymi metodami po długoterminowym przechowywaniu, pomimo początkowych pozytywnych wyników. Nasączamy szkiełka w 10 mM buforze fosforanu sodu (pH 6,8) i ogrzewa się je trzykrotnie w domowej kuchence mikrofalowej o mocy 500 W przez pięć minut, z jednominutową przerwą między ogrzewaniem. następnie barwiliśmy szkiełka dla p53 monoklonalnym przeciwciałem anty-p53 (PAb 1801, Oncogene Science, manhasset, NY) i zestawem Vectastain ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA). We wszystkich przypadkach wykryto antygen p53, a wybarwienie było doskonałe. Wyniki były zgodne z wynikami z pierwszych testów.
Slajdy grzewcze w kuchence mikrofalowej mogą być skuteczną metodą odzyskiwania antygenu przed barwieniem immunohistochemicznym dla p53, nawet jeśli preparaty były przechowywane przez dłuższy czas w temperaturze pokojowej.
Junji Kato, MD, Ph.D.
Dr Sumio Sakamaki, Ph.D.
Yoshiro Niitsu, MD, Ph.D.
Sapporo Medical University, 060 Sapporo, Japonia
2 Referencje1. Prioleau J, Schnitt SJ. strata antygenu p53 w przechowywanych slajdach parafinowych. N Engl J Med 1995; 332: 1521-1522
Full Text Web of Science MedlineGoogle Scholar
2. Shi SR, Key ME, Kalra KL. Odzyskiwanie antygenu w tkankach utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie: metoda wzmocnienia dla barwienia immunohistochemicznego w oparciu o ogrzewanie fragmentów tkanek mikrofalami. J Histochem Cytochem. 1991; 39: 741-748
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
Odpowiedź
Autorzy odpowiadają:
Do redakcji: Poprzednie badania wyraźnie pokazały, że użycie mikrofalówki do odzyskiwania antygenu jest konieczne dla optymalnego wybarwienia p53.1,2 W naszych badaniach raka przewodowego sutka in situ, zarówno przechowywane, jak i niezapisane slajdy poddano ogrzewaniu mikrofalowemu w buforze cytrynianowym (pH 6) przez dwa pięciominutowe okresy przed wybarwieniem p53. Stwierdziliśmy, że intensywność barwienia dla p53 w przechowywanych mikrofalach przechowywanych preparatach była konsekwentnie mniejsza niż w nie zapisanych preparatach poddanych takiemu traktowaniu. Natomiast Kato i in. badali wybarwianie p53 w innym typie nowotworu (rak jelita grubego), stosowali inną metodę ogrzewania mikrofalowego i najwyraźniej poddawali przechowywanym slajdom obróbce mikrofalowej, ale nie pozostawali bez zapisywania slajdów. Chociaż efekty ogrzewania mikrofalowego przechowywanych slajdów wydają się różnić w tych dwóch badaniach, różnice metodologiczne uniemożliwiają bezpośrednie porównanie wyników.
Chociaż slajdy wyraźnie muszą być ogrzewane w kuchence mikrofalowej dla uzyskania optymalnych wyników barwienia immunohistochemicznego dla p53, nasze doświadczenie było takie, że nawet przy takim traktowaniu, przechowywane slajdy nie barwiły się dla p53, jak również dla niezużytych szkiełek Jest możliwe, że inne metody odzyskiwania antygenu (które mogą lub nie mogą obejmować ogrzewania mikrofalowego) mogą poprawić wyniki barwienia p53 w przechowywanych preparatach.
John E. Prioleau, BA
Stuart J. Schnitt, MD
Beth Israel Hospital, Boston, MA 02215
2 Referencje1. Linden MD, Nathanson SD, Zarbo RJ. Ocena barwienia przeciwciał anty-p53: kontrola jakości i względy techniczne. Appl Immunohistochem 1994; 2: 218-224
Google Scholar
2. Resnick JM, Cherwitz D, Knapp D, Uhlman D, Niehans GA. Metoda mikrofalowa, która zwiększa wykrywanie nieprawidłowej ekspresji p53 w utrwalonych w formalinie tkankach zatopionych w parafinie. Arch Pathol Lab Med 1995; 119: 360-366
Web of Science MedlineGoogle Scholar
(12)
[hasła pokrewne: pyrantelum polpharma, dzięgiel litwor, rupafin syrop ]

Tags: , ,

No Responses to “Więcej informacji o utracie antygenu p53 w przechowywanych skrawkach parafiny”

  1. Grave Digger says:

    Nie ma czegoś takiego, jak “medycyna alternatywna”

  2. Broomspun says:

    [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: plan treningowy na mase[...]

  3. The China Wall says:

    Dreszcze bez gorączki

  4. Łucja says:

    [..] Artukul zawiera odniesienia do tresci: pomoc psychologiczna[...]

  5. Nikodem says:

    od 3 dni boli mnie brzuch z prawej strony kłuje mnie cos

Powiązane tematy z artykułem: dzięgiel litwor pyrantelum polpharma rupafin syrop